豬ELISA試劑盒的靈敏度可通過關(guān)鍵驗證實驗(回收試驗、精密度測試等)和核心判定指標(biāo)(線性范圍、檢測下限等)綜合判斷,同時需結(jié)合試劑盒說明書與樣本特性。
一、關(guān)鍵驗證實驗
通過實驗驗證試劑盒檢測低濃度樣本的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性:
回收試驗:向樣本添加已知濃度目標(biāo)物,回收率需在80%-120%,偏離提示基質(zhì)干擾(如血清成分抑制結(jié)合)。
二、精密度測試
板內(nèi)精密度:同板內(nèi)重復(fù)檢測低濃度樣本,變異系數(shù)(CV)≤5%;
板間精密度:不同批次試劑盒檢測同一樣本,CV≤10%,精密度差會導(dǎo)致低濃度結(jié)果波動[[1]]。
特異性交叉驗證:檢測結(jié)構(gòu)類似物(如家族蛋白),交叉反應(yīng)率需≤5%,避免假陽性干擾靈敏度判斷。
三、核心判定指標(biāo)
指標(biāo) | 定義 | 驗證方法 |
線性范圍 | 能準(zhǔn)確定量的濃度區(qū)間。 | 梯度稀釋樣本,實測濃度與理論值偏差需在80%-120%。 |
檢測下限(LOD) | 可穩(wěn)定檢出目標(biāo)物的zui低濃度,通常為空白樣本標(biāo)準(zhǔn)差的3倍對應(yīng)濃度。 | 通過空白樣本多次檢測計算標(biāo)準(zhǔn)差,推導(dǎo)zui低可檢出濃度。 |
定值血清測定 | 用低、中、高濃度定值血清測定,測得值需符合靶值范圍(±2S)。 | 對比實測值與定值血清靶值,判斷是否在合格區(qū)間。 |
四、結(jié)論與注意事項
優(yōu)先參考說明書:靈敏度數(shù)值通常在說明書中明確標(biāo)注,不同試劑盒可能采用不同判定方法。
樣本特性適配:若樣本中目標(biāo)物濃度極低(如納克級),需選擇LOD更低的試劑盒(如<0.1μmol/L)。
綜合驗證:單一指標(biāo)不能wanquan反映靈敏度,需結(jié)合回收試驗、精密度及線性范圍結(jié)果綜合評估。
